Mısır püskülünden (Stylus maydis) polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Basit Öğe Kaydı
dc.contributor.advisorGül Güven, Reyhan
dc.contributor.authorAslan, Nurten
dc.date.accessioned2017-12-28T10:33:17Z
dc.date.available2017-12-28T10:33:17Z
dc.date.issued2017
dc.date.submitted2015-06-15
dc.departmentDicle Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Biyoloji Anabilim Dalıen_US
dc.description.abstractBu çalışmada, mısır püskülü (Stylus maydis) polifenol oksidaz (PFO) enziminin saflaştırılması yapılmış ve bazı kinetik özellikleri incelenmiştir. Mısır püskülünden ekstrakte edilen polifenol oksidaz, (NH?)?SO? (amonyum sülfat) çöktürmesi, diyaliz, ultrafiltrasyon ve jel kromatografisi prosodürleri kullanılarak saflaştırıldı. Saflaştırılan enzim tek bir bant olarak SDS-PAGE’de elde edilmiştir. Mısır püskülünün PFO enziminin molekül ağırlığı ise yaklaşık 158 kDa civarında gözlemlenmiştir. Katekol ve 4-metil katekol substratları kullanılarak, PFO enziminin optimum pH ve sıcaklık değerleri belirlenmiştir. Polifenol oksidaz aktivitesi 4-metilkatekol ve katekol için 420 nm'de spektofotomtrik olarak ölçülmüştür. Optimum sıcaklık katekol için 40°C ve 4-metilkatekol için 30°C bulunmuştur. Optimum pH katekol için 8 ve 4-metilkatekol için 6 olarak tespit edilmiştir. Ayrıca PFO'nın substrat spesifikliği ve ısı inaktivasyonu incelenmiştir. PFO enziminin optimum pH ve sıcaklıkta katekol ve 4-metil katekol substratları için Km ve Vmax değerleri Linewear-Burk yöntemi ile bulunmuştur. Vmax/ Km değerlerine göre PFO enzimi için en uygun substratın katekol olduğu bulunmuştur. Ayrıca katekol kullanıldığında artan inaktivasyon süresine paralel olarak PFO aktivitesinin bariz bir şekilde azaldığı gözlemlenmiştir. EDTA, SDS ve sodyum azidin PFO aktivitesi üzerine inhibisyon etkisi katekol substratı kullanılarak etkisi incelendi. Bu çalışmada sırasıyla sodyum azidin % 26.6 EDTA’nın % 22.2 ve SDS’nin % 12.2 oranında enzimi inhibe ettiği tespit edildi. Ayrıca sukroz, fruktoz, riboz ve glikoz gibi karbonhidratların PFO aktivitesi üzerine etkisi araştırılmıştır. Fruktoz ve ribozun enzimi % 17 oranında aktive ettiği, glikozun % 16, sukrozun ise % 4 oranında aktive ettiği tespit edilmiştir. Anahtar Kelimeler: Stylus maydis,Polifenol oksidaz ,substrat spesifikliği,inhibisyon.
dc.description.abstractIn this work, purification of polifenol oxidase enzyme from stylus maydis was done and some kinetic characteristics were analysed. Polifenol oxidase extracted from stylus maydis was purified by the procedures of ammonium sulphate (NH?)?SO? precipitation, dialysis, ultrafiltration and jel chromatography. One band for purified enzyme was obtained by SDS-PAGE. Molecular weight of stylus maydis PPO enzyme was calculated as approximately 158 kDa. Optimum pH and temperature values of PPO enzyme were determined by using catechol and methyl catechol substrates. Polifenol oxidase activity was measured for 4-methyl catechol ve catechol at 420 nm as spectrophotometric. Optimum temperature was founded as 40°Cfor catechol and 30°C for 4-methyl catechol. Optimum pH was determined as 8 for catechol and 6 for 4-methyl catechol. Besides, substrat specifity and temperature inactivation of PPO were analysed. PPO enzyme’s Km and Vmax values for catechol and 4-methyl catechol substrates at optimum pH and temperature were determined by using Linewear-Burk method. According to Vmax and Km values, the most suitable substrate was found to be catechol. Furthermore, it was observed that PPO activity decreased clearly in paralel with increasing inactivation time when catechol used. Inhibition effect of EDTA, SDS and sodium azide on PPO activity was analysed by using catechol substrate. In this work, sodium azide, EDTA and SDS were found to inhibit the enzyme activity as 26.6 %, 22.2 % and 12.2 %, respectively. Besides, the effects of carbohydrates such as sucrose, fructose, ribose and glucose on PPO activity were investigated. The enzyme was found to be activated 17 % by fructose and ribose, 16 % by glucose and 4 % by sucrose. Key words: Stylus maydis, polyphenol oxidase, substrate specifity, inhibition.
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/11468/3585
dc.institutionauthorAslan, Nurten
dc.language.isotren_US
dc.relation.publicationcategoryTezen_US
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/embargoedAccessen_US
dc.subjectStylus maydisen_US
dc.subjectPolifenol oksidazen_US
dc.subjectSubstrat spesifikliğien_US
dc.subjectİnhibisyonen_US
dc.subjectStylus maydisen_US
dc.subjectPolyphenol oxidaseen_US
dc.subjectSubstrate specifityen_US
dc.subjectInhibitionen_US
dc.titleMısır püskülünden (Stylus maydis) polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonuen_US
dc.typeMaster Thesisen_US

Dosyalar

Orijinal paket
Listeleniyor 1 - 1 / 1
Küçük Resim
İsim:
Mısır püskülünden (Stylus maydis) polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu.pdf
Boyut:
1.53 MB
Biçim:
Adobe Portable Document Format
İndir
Lisans paketi
Listeleniyor 1 - 1 / 1
[ X ]
İsim:
license.txt
Boyut:
1.71 KB
Biçim:
Item-specific license agreed upon to submission
Açıklama:
İndir

Koleksiyon

Fen Bilimleri Enstitüsü Tezler