Yazar "Ahmetoğlu, Nazenin" seçeneğine göre listele

Listeleniyor 1 - 2 / 2
  • Küçük Resim
    Öğe
    Bacillus cereus KG5' in proteaz enzimi üzerine çalışmalar
    (2015) Ahmetoğlu, Nazenin
    Bu çalışmada, Kös (Bingöl) kaplıcasından izole edilen Bacillus cereus KG5' in endüstride geniş uygulama alanına sahip olan ekstraselüler proteaz enzimi üzerine çalışmalar yapılması amaçlanmıştır. B.cereus KG5 BM besi yerinde kültüre alındı ve değişik inkübasyon sürelerinde proteaz aktivite tayini yapılarak maksimum enzim üretimi 24.saatte tespit edildi. pH ve sıcaklığın proteaz enzimi üzerindeki etkisi pH 6-11 ve sıcaklık 20°C ile 70ºC aralığında araştırıldı. Enzimin optimum pH ve sıcaklık değerinin sırasıyla 7.0 ve 40-45ºC arası olduğu tespit edildi. Farklı besi yerlerinin, %1.2 oranında farklı azot ve %2 oranında karbon kaynaklarının enzim üretimi üzerindeki etkisi incelendi. Maksimum enzim üretimi BM besi yerinde elde edildi. En iyi azot kaynağı yeast ekstrakt ve üre, en iyi karbon kaynağı ise laktoz ve galaktoz olarak belirlenirken karbon kaynaklarından glukozun enzim üretimini inhibe ettiği tespit edildi. Farklı yeast konsantrasyonlarının enzim üretimi üzerindeki etkisi araştırıldı. %0.5 yeast ekstraktta maksimum enzim üretimi elde edilmiştir. Artan yeast ekstrakt konsantrasyonlarında enzim üretiminde azalma gözlenmiştir. %0.5 oranında farklı metal iyonlarının enzim üretimi üzerindeki etkisi araştırıldı. CaCl2' nin enzim üretimini yaklaşık 2 kat arttırırken, NaCl ve MgCl2' nin üretimi önemli ölçüde azalttığı tespit edildi. CaCl2' nin enzim üretimi üzerindeki etkisi araştırıldı. Maksimum enzim üretimi %0.5, en düşük üretimin ise %0 CaCl2 konsantrasyonlarında elde edilmiştir. B.cereus KG5' e ait kısmi olarak saflaştırılan proteaz enzim aktivitesi üzerine bazı metallerin, kimyasalların, metal şelatörlerin ve deterjanların etkisi araştırıldı. CaCl2 (2 mM' da %142), MgCl2 (5 mM ve 10 mM' da %89) ve MnCl2'nin (2 mM' da %29) proteaz aktivitesini belirli oranlarda arttırdığı, CuCl2, HgCl2 ve ZnCl2 (10 mM' da) ise enzim aktivitesini sırasıyla %100, %100' den fazla ve %96 oranında inhibe ettiği ve metal şelatörleri olan EDTA ve 1-10 phenantroline'nin (10 mM' da sırasıyla %96 ve %95) proteaz enzimini güçlü bir şekilde inhibe ettiği tespit edildi. PMSF'nin etkisinde ise etanole bağlı bir inhibisyonun olduğu belirlendi. % 1 SDS'nin tamamen, %1 Alo' nun %84 oranında, %0.5 Triton X-100' ün %5 oranında ve %0.1 Tween-80' in % 2 oranında enzim aktivitesini inhibe ettiği tespit edilmiştir. Enzimin termal stabilitesinin araştırılması sonucunda 40ºC' de 120 dakika sonunda enzimin oldukça stabil olduğu tespit edilmiştir. Enzimin termal stabilitesinin CaCl2 tarafından arttıldığı belirlendi. 2 mM CaCl2 enzimin 50ºC' de 120 dakika sonunda orijinal aktivitesini % 102 oranında koruduğu tespit edildi. Bu çalışmada B.cereus KG5' e ait proteaz enzimi amonyum sülfat çöktürmesi&diyaliz ve Sefadeks G-75 jel geçirgenlik kromatografisi ile %23 verimle 13 kat saflaştırıldı. Sefadeks G-75 jel geçirgenlik kromatografisi ile saflaştırılan enzimin nondenatüre poliakrilamid jel elektroforezi ile varlığı tespit edilirken, SDS-PAGE ile de molekül ağırlığı yaklaşık 48 kDa civarında olduğu tespit edildi. Anahtar Kelimeler: Bacillus cereus KG5, Biyoteknoloji, proteaz enzim üretimi ve karakterizasyonu
  • [ X ]
    Öğe
    Production, purification and characterisation of thermostable metallo-protease from newly isolated bacillus sp KG5
    (Foundation for Enviromental Protection and Research, 2015) Ahmetoğlu, Nazenin; Bekler, Fatma Matpan; Acer, Ömer; Güven, Reyhan Gül; Güven, Kemal
    Background: Due to the importance of microbial proteases in biotechnological applications, a number of microorganisms are being explored. The production, purification and characterisation of extracellular metallo-proteases by producing Bacillus sp. KG5 was studied. Material and Methods: Bacterial strain KG5 was isolated from Kös (Bingöl) hot spring. The strain KG5 was identified by morphological, physiological, biochemical and 16S rRNA gene sequencing. The effects of various parameters on protease production, such as time, temperature, pH, carbon and nitrogen sources and CaCl2were studied. The enzyme was purified by ammonium sulphate precipitation and Sephadex G-75 gel permeation chromatography. Molecular weight was calculated by sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and zymographic analysis. The effects of some metal ions, chelators and inhibitors on enzyme activity were determined. Results: The optimum temperature, pH and incubation period for protease production were 40-45°C, 7.0 and 24 h, respectively. It was determined that the best nitrogen sources were yeast extract and urea, while the best carbon sources were lactose and galactose. However, glucose as a source of carbon was found to inhibit the production of the enzyme. The maximum enzyme production was increased in the presence of CaCl2. The molecular weight of purified enzyme was found to be approximately 48 kDa. It was found that the enzyme was fully stable in the presence of 2 mM CaCl2 at 50°C after 120 min. Purified protease was significantly activated by Ca2+ and Mg2+, while it was greatly inhibited by Cu2+, Zn2+, Hg2+ and SDS as well as by the metal ion chelators ethylenediaminetetraacetic (EDTA) and 1,10-phenanthroline. Phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) had a little effect on the enzyme. Conclusions: Our findings suggest the potential of this isolate for protease production and that this enzyme may be suitable for biotechnological applications.